El Dr. Gene Yeo del UCSD spoke about his recent work on targeting RNA degradation using Crispr-Cas13d. His lab focused on RNA binding proteins (RBPs) as regulators of gene expression, and as drug targets. He has developed methods to systematically study RBP functions, such as the enhanced eCLIP method, which his lab has done to characterize >200 RBPs. He has also developed methods to track RNA using live imaging in single cells. His methods have been used to target repeat expansion RNAs using Crispr-Cas technology. Recently he has focused on using the Cas13d enzyme to degrade specific RNAs, including HTT by targeting the CAG repeat. The Cas13d/cripsr system can fit into AAVs and therefore can be used for in vivo studies without having to use a dual vector system. He showed that this system can degrade the HTT RNA and correct some of the molecular alterations found in HD iPSCs, in a collaboration between his lab and the lab of Dr. Leslie Thompson.
Gen pasó a describir de que su sistema tiene menos fuera de objetivo efectos sobre otros CAG-contiene repita los genes. Roedores experimentos con AAV-Cas13d/CAGex en Q175s pueden paliar los efectos del comportamiento en este modelo, la disminución de la HTT agregado de la patología, y también restaurar el volumen del estriado. El efecto sobre la Q175s parecía ser alelo específico, ya que no hay cambios en el tipo salvaje ratón HTT fueron detectados por Western blot, sin evidencia de inflamación o destinatarios de los efectos. Su laboratorio se centra ahora en otros humanos de las prácticas comerciales Restrictivas de mejorar la terapéutica de desarrollo. Adicionales importantes en el análisis se carece, en mi opinión, en términos de la especificidad de este enfoque y su aplicabilidad para el desarrollo terapéutico, pero este enfoque es significativo ya que los objetivos de la ARN en lugar de ADN utilizando crispr (por lo tanto no permanentemente la edición del genoma, incluyendo involuntaria lugares del genoma), permitiendo a los potenciales alelo-específicos de la orientación que podría ser mejor tolerado.
El Dr. Irina Antonijevic de la terna de la Terapéutica describe su trabajo en el desarrollo de una terapéutica de oligonucleótidos antisentido (ASO), la orientación de la gen Msh3, un gen crítico que controla somáticas de expansión de la HTT número de repeticiones de CAG en el cerebro, como se identifica por la AGA (asociación amplia del genoma) de los estudios. Inicialmente, Msh3 fue demostrado para regular la inestabilidad somática de la HTT gen en los ratones y los humanos estudios de asociación genética compatible la conservación de Msh3 función en el control de la tasa de expansión de la repetición de CAG y la edad de inicio del motor de diagnóstico en HD de los individuos.
El ESCUDO-HD el estudio es un estudio de la historia natural llevado a cabo por el Triplete que ha inscrito a 70 personas en 9 sitios en 5 países (estados UNIDOS, Canadá, Francia, Alemania y reino unido). El estudio tendrá una duración de 2 años y apoyo a la prevista de la Fase 1/2a estudio con la ASO. Irina se describen los datos iniciales sobre la resonancia magnética estructural de los cambios en el volumen del caudado y del volumen ventricular durante el estudio longitudinal a lo largo de un período de 48 semanas, lo que sugiere que la imagen puede ser adecuado como un biomarcador de extremo de pista. El PIN HD mediciones incluye un compuesto del total de la puntuación motora, SDMT (solo dígito modalidad de prueba), y evaluador de las puntuaciones, y también mostró cambios durante el período monitoreado hasta el momento. También son la medición de los niveles de LCR de la NFL (neurofilamentos la luz de la cadena), pero ella no informe de resultados.
Irina then described recent work in NHPs the work done to advance TTX-3360, the clinical candidate ASO. The extent of Msh3 suppression after ICV administration is large and sustained over a 24-week period (>50% suppression is the target for Msh3, based on the work in rodents suggesting this level of suppression should modulate SI of the HTT CAG repeat). Finally, they described the biomarker work done on TTX-3360 using CSF measurements of Msh3 mRNA contained inside brain-derived exosomes (extracellular vesicles). The SHIELD-HD samples of CSF were essential for assay development to detect Msh3 levels and changes after ASO administration. The final platform included qPCR analysis for mRNA detection in human and primate CSF. Housekeeping control genes include HKG, ActB and EEF2 for normalization of the changes in the CSF after treatments. The use of these control genes were corroborated with the CSF samples from the SHIELD-HD study, ensuring no change in untreated individuals over time. In the NHP studies, cisterna magna collection of CSF was better for Msh3 detection over collections via intrathecal (lumbar) collection of CSF. This is pending confirmation in human collection studies. They also measured healthy and HD Msh3 expression in CSF vesicles, which did not change over disease (but the sample size was small). There is a 2/3-fold variability in expression across the individuals measured. No longitudinal data has been analyzed yet, although this is a critical area of work.
Por cierto, que informan de que la distribución del tamaño de las vesículas extracelulares aislado de CSF cambio en el curso de la enfermedad – así que este es un aspecto que desea proseguir. Los datos No se presentaron en vivo, que la dosificación de la ASO cambios Msh3 niveles en LCR de EVs que se correlacionan con el parénquima la reducción de la meta. Este es el estudio crítico que está pendiente.
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